LncRNA<italic style="font-style: italic">-PVT1/</italic>miR-15a<italic style="font-style: italic">/Bmi-1</italic>通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

侯婧瑛; 吴雅娴; 金小岩; 凌辉; 于霆峰; 王凌云

doi:10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0508

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LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

基础研究 | 更新时间：2024-02-19

- LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖
- LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1 Pathway Regulates the Proliferation of HGC-27 Gastric Cancer Cells in Vitro
- 中山大学学报（医学科学版） 2021年42卷第5期页码：703-713
- 作者机构：
  
  1.中山大学孙逸仙纪念医院临床研究中心，广东广州 510120
  2.中山大学孙逸仙纪念医院消化内科，广东广州 510120
  3.中山大学孙逸仙纪念医院综合科，广东广州 510120
  4.深圳市人民医院，广东深圳 518020
- 作者简介：
  
  侯婧瑛，博士，副主任医师，研究方向：消化道肿瘤，E-mail：maomaohjy@126.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金(81700242);广州市科技计划项目(201704020121;202102080386);广东省医学科研基金(C2018059)
- DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0508
  中图分类号： R735.2
- 收稿：2021-05-14，
  
  纸质出版：2021-09-20
- 稿件说明：
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侯婧瑛,吴雅娴,金小岩等.LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖[J].中山大学学报（医学科学版）,2021,42(05):703-713.

HOU Jing-ying,WU Ya-xian,JIN Xiao-yan,et al.LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1 Pathway Regulates the Proliferation of HGC-27 Gastric Cancer Cells in Vitro[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2021,42(05):703-713.
侯婧瑛,吴雅娴,金小岩等.LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖[J].中山大学学报（医学科学版）,2021,42(05):703-713. DOI： 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0508.

HOU Jing-ying,WU Ya-xian,JIN Xiao-yan,et al.LncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1 Pathway Regulates the Proliferation of HGC-27 Gastric Cancer Cells in Vitro[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2021,42(05):703-713. DOI： 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0508.

摘要

目的

探讨lncRNA

-PVT1/

miR-15a

/Bmi-1

通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。

方法

分别研究

PVT1，

miR-15a及

Bmi-1

在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别：①空白对照组、si-

PVT1

（转染

PVT1

siRNA）和si-

PVT1

NC（转染

PVT1

siRNA scramble阴性对照）；②空白对照组、miR-15a（转染miR-15a模拟物）和miR-15a NC（转染miR-15a模拟物的阴性对照）。③空白对照组、si-

Bmi-1

（转染

Bmi-1

的siRNA）和si-

Bmi-1

NC（转染

Bmi-1

的siRNA scramble阴性对照）。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制

PVT1

后检测不同组别

PVT1、

miR-15a和

Bmi-1

的表达情况。为验证miR-15a与

Bmi-1

之间的调节关系，将HGC-27胃癌细胞株分为3组：空白对照、miR-15a（转染miR-15a模拟物）和miR-15a NC（转染模拟物阴性对照），检测各组miR-15a和

Bmi-1

的表达情况。通过生物信息学网站预测

PVT1

与miR-15a以及miR-15a与

Bmi-1

的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证

PVT1

与miR-15a以及miR-15a和

Bmi-1

之间的靶向调节关系。在前述基础上，逆向验证

PVT1

、miR-15a和

Bmi-1

三者之间的调控关系。

结果

抑制

PVT1、Bmi-1

或者过表达miR-15a后，HGC-27胃癌细胞的OD

490

值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低（

0.01）；抑制

PVT1

后，

Bmi-1

的表达出现降低，而miR-15a表达增高（

0.01）；转染miR-15a后，miR-15a表达升高，而

Bmi-1

表达出现降低（

0.01）。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比，

PVT1

以及

Bmi-1

野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低，两者分别下降约56%和32%左右（

0.01）。与空白对照组和si-

PVT1

NC组相比，si-

PVT1

组

PVT1

和

Bmi-1

表达明显下降，miR-15a表达升高，在si-

PVT1

组加入miR-15a

inhibitor之后，miR-15a表达下降，

PVT1

和

Bmi-1

的表达降低均出现了逆转；而si-

PVT1

组加入miR-15a后，miR-15a表达升高，在si-

PVT1

组加入miR-15a之后，miR-15a表达升高，

PVT1

和

Bmi-1

的表达出现进一步下降。

结论

LncRNA

-PVT1

能够通过靶向抑制miR-15a上调

Bmi-1

（lncRNA

-PVT1/

miR-15a

/Bmi-1

通路），进而促进胃癌细胞的体外增殖。

Abstract

Objective

To investigate the role of lncRNA

-PVT1/

miR-15a

/ Bmi-1

pathway in the proliferation of HGC-27 gastric cancer cells in vitro.

Methods

Gastric cancer cell line HGC-27 was cultured in vitro and divided into the following groups：（1） blank control， si-

PVT1

and si-

PVT1

NC. The si-

PVT1

and si-

PVT1

NC groups were transferred with

PVT1

siRNA and

PVT1

siRNA scramble， respectively. （2） blank control， miR-15a and miR-15a NC. （3） blank control， si-

Bmi-1

and si-

Bmi-1

NC. Cell proliferation was evaluated by using MTS. The expression of

PVT1

， miR-15a and

Bmi-1

was detected in the condition of

PVT1

inhibition. In order to validate the relationship between miR-15a and

Bmi-1

，

miR-15a

mimic was transfected into HGC-27 gastric cancer cell line， and the expression of miR-15a and

Bmi-1

was examined. The potential complementary binding sites of

PVT1

and miR-15a

，

and miR-15a and

Bmi-1

were predicted by bioinformatics. Dual-luciferase reporter assay was performed to detect luciferase activity of the different groups of cells in order to verify the relationship between

PVT

1 and miR-15a and miR-15a and

Bmi-1

. Relevant rescue experiment was conducted in order to further validate the mutual relationship of lncRNA

-PVT1，

miR-15a

and Bmi-1

Results

490

value and cell proliferation rate were significantly decreased in the condition of

PVT1

Bmi-1

inhibition， or miR-15a overexpression （

0.01）. The expression of

Bmi-1

was decreased in si-

PVT1

group， whereas miR-15a was increased （

0.01）. miR-15a was increased after transfection， whereas the expression of Bmi-1 was decreased （

0.01）. The dual luciferase reporter assay indicated that both the

PVT1

and

Bmi-1

reporter gene luciferase activity were decreased significantly in miR-15a mimics group， down-regulating 56% and 32%， respectively （

0.01）. The expression of

PVT1

and Bmi-1 was elevated in the condition of

PVT1

knockdown and miR-15a inhibition， whereas both of their expression were further decreased in the condition of

PVT1

knockdown and miR-15a transfection.

Conclusion

LncRNA

-PVT1

could upregulate

Bmi-1

（lncRNA

-PVT1/

miR-15a

/Bmi-1

pathway） to promote the proliferation of gastric cancer cells in vitro by inhibiting miR-15a.

关键词

Keywords

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