CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用
CircSLC8A1_005 Inhibits the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts by Encoding Protein
- 中山大学学报（医学科学版） 2024年45卷第1期 页码：35-44
- 作者机构：
1.华南理工大学医学院，广东 广州 510006
2.南方医科大学第二临床医学院，广东 广州 510280
3.广东省心血管病研究所心内科，广东 广州 510080
4.广东省人民医院检验科，广东 广州 510080
5.广东省人民医院麻醉科，广东 广州 510080
6.广东省临床药理学重点实验室//南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院 广东 广州 510080
- 作者简介：
胡雅婷，第一作者，研究方向：心肌纤维化的分子机制，E-mail：786491725@qq.com
- 基金信息：国家自然科学基金(82070254;82200325;82300277);广东省自然科学基金(2023A1515010201;2022A1515012522;2022A1515012175;2021A1515220122);广州市科技计划项目(202201011627;202102080093)
DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2024.0106
中图分类号： R363.2纸质出版日期：2024-01-20，
收稿日期：2023-09-13，
录用日期：2023-11-27
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胡雅婷,高原,伍华燕等.CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用[J].中山大学学报（医学科学版）,2024,45(01):35-44.
HU Yating,GAO Yuan,WU Huayan,et al.CircSLC8A1_005 Inhibits the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts by Encoding Protein[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2024,45(01):35-44.
胡雅婷,高原,伍华燕等.CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用[J].中山大学学报（医学科学版）,2024,45(01):35-44. DOI： 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2024.0106.
HU Yating,GAO Yuan,WU Huayan,et al.CircSLC8A1_005 Inhibits the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts by Encoding Protein[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2024,45(01):35-44. DOI： 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2024.0106.
摘要
目的
2
探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。
方法
2
利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达circSLC8A1_005，并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链（Col1a1）、Ⅲ型胶原α1链（Col3a1）和平滑肌肌动蛋白α2（Acta2）基因表达，通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列（IRES）的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双萤光素酶报告基因实验检测SLC8A1-605aa对超氧化物歧化酶2（Sod2）的转录激活作用。通过RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验检测SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA的结合作用。放线菌素D实验检测SLC8A1-605aa对Sod2 mRNA稳定性的影响。
结果
2
利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达circSLC8A1_005，过表达circSLC8A1_005可显著抑制mCFs中纤维化相关基因表达，抑制mCFs的增殖和迁移能力。双萤光素酶报告基因实验结果提示circSLC8A1_005包含的2个IRES具有活性。Western blot检测结果显示circSLC8A1_005可翻译预期大小为70 ku的SLC8A1-605aa蛋白，并主要分布于细胞核内。过表达SLC8A1-605aa和circSLC8A1_005可一致地抑制mCFs的纤维化表型。SLC8A1-605aa可特异上调超氧化物歧化酶2（Sod2）表达，但并不能转录激活Sod2表达；RIP实验结果显示SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA有特异结合作用，而放线菌素D实验结果显示SLC8A1-605aa能够增强Sod2 mRNA的稳定性。
结论
2
CircSLC8A1_005通过翻译蛋白SLC8A1-605aa发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用，SLC8A1-605aa可能是潜在的用于心肌纤维化治疗的靶点。
Abstract
Objective
2
To investigate the effect of circSLC8A1_005 on the fibrotic phenotype of cardiac fibroblasts and the potential mechanism involved.
Methods
2
The effect of adenovirus-mediated overexpression of circSLC8A1_005 on the expression of fibrosis-related genes， collagen type I alpha 1 chain （Col1a1）， collagen type Ⅲ alpha 1 chain （Col3a1） and smooth muscle actin alpha 2 （Acta2）， in mouse cardiac fibroblasts （mCFs） were detected. The proliferation and migration activities of mCFs were detected by EdU and wound-healing assay， respectively. Dual luciferase reporter gene assay was performed to detect the activity of potential internal ribozyme entry site （IRES） in circSLC8A1_005. CircSLC8A1_005-translated protein， SLC8A1-605aa， and its intracellular distribution was identified by Western blot assay. The effect of SLC8A1-605aa protein on transcription activity of Sod2 gene was detected by the dual luciferase reporter gene assay. RNA binding protein immunoprecipitation （RIP） was utilized to verify the interaction between SLC8A1-605aa and superoxide dismutase 2 （Sod2） mRNA. Actinomycin D treatment was used to detect the effect of SLC8A1-605aa on Sod2 mRNA stability in mCFs.
Results
2
An efficient adenovirus-mediated overexpression of circSLC8A1_005 was achieved in mCFs. The enforced expression of circSLC8A1_005 suppressed proliferation and migration of mCFs， and inhibited the expression of fibrosis-related genes in mCFs. The dual luciferase reporter gene assay revealed the activities of 2 IRES in circSLC8A1_005. Results of Western blot assay showed that circSLC8A1_005 could translate protein SLC8A1-605aa with the prospected molecular weight of 70 ku， which is predominantly distributed in the nucleus. Overexpression of the circSLC8A1_005 and SLC8A1-605aa could consistently inhibit the fibrotic phenotype of mCFs. SLC8A1-605aa could up-regulate superoxide dismutase 2 （Sod2） expression， but not at the transcriptional level. RIP assay indicated that SLC8A1-605aa could specifically interact with Sod2 mRNA， and the results of actinomycin D assay showed that SLC8A1-605aa could enhance the stability of Sod2 mRNA in mCFs.
Conclusion
2
CircSLC8A1_005 inhibits the fibrotic phenotype of cardiac fibroblasts via translating SLC8A1-605aa protein， and SLC8A1-605aa may be a potential target for the treatment of myocardial fibrosis.
关键词
心肌纤维化环形RNAcircSLC8A1_005翻译心肌成纤维细胞
Keywords
cardiac fibrosiscircular RNAcircSLC8A1_005translationcardiac fibroblast
references
Chen H， Moreno-Moral A， Pesce F， et al. WWP2 regulates pathological cardiac fibrosis by modulating SMAD2 signaling［J］. Nat Commun，2019，10：3616.
Wei L， Liu L， Bai M， Ning X， Sun S. CircRNAs： versatile players and new targets in organ fibrosis［J］. Cell Commun Signal， 2023，21（1）：90.
Bei Y， Yang T， Wang L， et al. Circular RNAs as potential theranostics in the cardiovascular system［J］. Mol Ther Nucleic Acids， 2018 ，13：407-418.
覃秋语，吕祥威，何梓峰等.Ang Ⅱ诱导大鼠心房肌纤维化的mRNA表达谱变化［J］.四川大学学报（医学版），2023，54（5）：959-964.
Qin QY， Lyu XW， He ZF， et al. mRNA Expression Profile Changes in Angiotensin-Ⅱ-Induced Atrial Myocardial Fibrosis in Rats［J］. J Sichuan Univ （ Med Sci ）， 2023， 54（5）： 959-964.
Lei M， Zheng G， Ning Q， et al. Translation and functional roles of circular RNAs.in human cancer［J］. Mol Cancer， 2020 ，19（1）：30.
Li X， Liu CX， Xue W， et al. Coordinated circRNA biogenesis and function with NF90/NF110 in viral infection［J］. Mol Cell， 2017， 67（2）：214-227.
黄智琪，严钰敏，郭晶等.环状RNA circ＿0036176结合miR-218-5p发挥抑制心肌纤维化的作用［J］.中山大学学报（医学科学版），2022，43（1）：61-69.
HUANG Zhi-qi ，YAN Yu-min，GUO Jing，et al.Circular RNA circ_0036176 inhibiting myocardial fibrosis via sponging miRNA-218-5p［J］. J SUN Yat-sen Univ （Med Sci）， 2022，43（1）：61-69.
Yousefi F， Soltani BM. Circular RNAs as potential theranostics in the cardiac fibrosis［J］. Heart Fail Rev， 2021， 26（1）：195-203.
Diallo LH， Tatin F， David F， et al. How are circRNAs translated by non-canonical initiation mechanisms［J］ Biochimie， 2019， 164：45-52.
Liu CX， Chen LL. Circular RNAs： Characterization， cellular roles， and applications［J］. Cell， 2022，185（12）：2016-2034.
丰嘉欣，郭继深，梁俣等.Circ＿0018478通过编码HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用［J］.中山大学学报（医学科学版），2022，43（6）：995-1004.
Feng JX， Guo JS， Liang Y， et al. Circular RNA circ_0018478 inhibits the fibrotic phenotype of cardiac fibroblasts via encoding protein HERC4-193［J］. J SUN Yat-sen Univ （Med Sci）， 2022，43（6）：995-1004.
Valiente-Alandi I， Potter SJ， Salvador， et al. Inhibiting fibronectin attenuates fibrosis and improves cardiac function in a model of heart failure［J］. Circulation， 2018，138（12）：1236-1252.
Chen LL. The expanding regulatory mechanisms and cellular functions of circular RNAs［J］. Nat Rev Mol Cell Bio， 2020， 21（8）， 475-490.
van Heesch S， Witte F， Schneider-Lunitz V， et al. The translational landscape of the human heart［J］. Cell， 2019，178（1）：242-260.
Wu N， Li F， Yang W， et al. Silencing mouse circular RNA circSlc8a1 by circular antisense cA-circSlc8a1 induces cardiac hepatopathy［J］. Mol Ther， 2023，31（6）：1688-1704.
Du WW， Xu J， Yang W， et al. A Neuroligin isoform translated by circNlgn contributes to cardiac remodeling［J］. Circ Res. 2021，129（5）：568-582.
An Y， Duan H. The role of m6A RNA methylation in cancer metabolism［J］. Mol Cancer， 2022，21（1）：14.
Zhang L， Chen CL， Kang PT， et al. Differential protein acetylation assists import of excess SOD2 into mitochondria and mediates SOD2 aggregation associated with cardiac hypertrophy in the murine SOD2-tg heart［J］. Free Radic Biol Med， 2017，108：595-609.
Li K， Zhai M， Jiang L， Song F， et al. Tetrahydrocurcumin ameliorates diabetic cardiomyopathy by attenuating high glucose-induced oxidative stress and fibrosis via activating the SIRT1 pathway［J］. Oxid Med Cell Longev， 2019，2019：6746907.
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